El anticuerpo anti insulina (IA), generado por la terapia insulínica, también integra el espectro de técnicas analíticas en el área. La aplicación práctica de este análisis en la Medicina Asistencial Diabetológica presenta un creciente interés por su valor predictivo y diagnóstico.

La determinación eficiente mediante el método, radiométrico de referencia, no se halla disponible rutinariamente en nuestro medio a través de kits comerciales, de bajo costo, para Bioquímica Clínica. Desde el ámbito científico-tecnológico académico se provee esta metodología basada en diseños analíticos originales en este caso Radioinmunoanálisis, RIA, como servicio especializado directo para la comunidad médica por derivación del área bioquímica

Test de unión de radioligando (RBA): El trazador [125I]insulina A14 se prepara a partir de insulina humana recombinante farmacéutica, purificada de sus conservadores por exclusión molecular, y de Na125I. La separación del derivado A14 se realiza mediante HPLC fase reversa. Luego el trazador (aprox. 10.000 cpm) se incuba con una serie de diluciones del suero bajo análisis en una solución reguladora, tras lo cual se procede con la etapa separativa usando Proteína A-Sepharose y se determina la actividad de los precipitados en un contador gamma. Luego de establecer la dilución apropiada de trabajo, se realiza el ensayo de desplazamiento en las mismas condiciones anteriores utilizando una serie de concentraciones crecientes de insulina fría patrón como desplazante. El procesamiento de los resultados incluye el análisis de Scatchard y el ajuste computado de los datos para la estimación de los parámetros de afinidad y concentración de los anticuerpos específicos (IA). Los resultados se informan en unidades absolutas de Capacidad de Unión (BC), expresables en términos de Unidades de Insulina por litro de plasma.

El anticuerpo anti GAD (GADA), dirigido hacia el respectivo antígeno presente en las células beta de los islotes pancreáticos, representa un marcador sérico específico de agresión autoinmune en la diabetes mellitus insulinodependiente, tipo 1. La aplicación práctica de este análisis en la Medicina Asistencial Diabetológica presenta un creciente interés por su valor predictivo y diagnóstico

La determinación eficiente mediante el método inmunoenzimático de costos reducidos, no se halla disponible rutinariamente en nuestro medio a través de kits comerciales de bajo costo, para Bioquímica Clínica. Desde el ámbito científico-tecnológico académico se provee esta metodología basada en diseños analíticos originales, en este caso ELISA, como servicio especializado directo para la comunidad médica por derivación del área bioquímica

Determinación por ELISA: Se adsorbe el antígeno biosintético desarrollado por el grupo (proteína quimérica recombinante Tiorredoxina-GAD65 humana) sobre microplacas de ELISA y luego de la colocación del suero con el analito (GADA) en que se verifica la primera reacción antígeno-anticuerpo, se procede con la segunda etapa en la cual se produce la interacción con el antígeno biotinilado en solución. Finalmente se procede con la etapa de desarrollo de color a través de avidina peroxidasa que, fijada a los complejos, transforma el sustrato cromogénico.

Evaluación de la actividad anti-inflamatoria de aditivos para alimentos por inhibición de la liberación de Óxido Nítrico (NO)

1- Extracción de macrófagos peritoneales de ratón y empleo de células RAW (células de línea) para definir las más adecuadas para la evaluación de la actividad anti-inflamatoria. 2- Cultivo de las células en botellas plásticas con medio de cultivo y Suero Fetal Bovino (SFB). 3- Distribución de las células en placas de 24 orificios y estimulación con concentraciones crecientes de Lipopolisacaridos (LPS) para determinar la concentración de trabajo para la liberación de Oxido Nítrico (ON). 4- Determinación de la viabilidad celular con MTT para comprobar toxicidad de los reactivos. 5- Determinación de la liberación de ON con reactivo de Griess. Todo realizado por duplicado. 6- Cultivo de las células en placas de 24 orificios y agregado de concentraciones crecientes de Aspirina y Dexametasona. Incubar 1 h. 7- Agregar las concentraciones determinadas en 3 de Lipopolisacaridos (LPS). Incubar 24-48 h. 8- Determinación de la viabilidad celular con MTT para comprobar toxicidad de los reactivos. 9- Determinación de la liberación de ON con reactivo de Griess. 10- Todos los ensayos se realizarán por duplicado. B- Evaluación de los 5 aditivos para alimentos. 1- Se intenta la solubilización de los aditivos en: a- Solución fisiológica (PBS), b- Solución fisiológica acidulada (pH 4) y c- Dimetil Sulfóxido (DMSO). En caso que no sea satisfactoria la dilución, los aditivos se utilizan como polvo. 2- Cultivo de las células en placas de 24 orificios y agregado de concentraciones crecientes de los 5 aditivos y las concentraciones determinadas en sección A de Aspirina y Dexametasona. Incubar 1 h. 3- Agregar las concentraciones determinadas en sección A de Lipopolisacaridos (LPS). Incubar 24-48 h. 4- Determinación de la viabilidad celular con MTT para comprobar toxicidad de los reactivos. 5- Determinación de la liberación de ON con reactivo de Griess. 6- Todos los ensayos se realizan por duplicado.